By this author

Monoclonal AntibodyAgainst the Oligomeric Form of the Large C-Terminal Fragment (Met225–Ile412) of Hemolysin II of Bacillus cereus are Capable of Strain-Specific Suppression of Hemolytic Activity

Issue number 2 from 30.12.2025

Порообразующий токсин гемолизин II (HlyII), секретируемый грамположительной бактерией Bacillus cereus, – один из основных патогенных факторов данного микроорганизма. Действие HlyII приводит к лизису клеток вследствие порообразования на мембранах. Гибридомной технологией получены моноклональные антитела против большого С-концевого фрагмента (Met225–Ile412, HlyIILCTD) HlyII B. cereus с использованием в качестве антигена рекомбинантной растворимой формы HlyIILCTD, которую получали с использованием белка-шаперона SlyD. Моноклональное антитело LCTD-83 ингибировало гемолитическую активность HlyII, степень защиты зависела от присутствия/отсутствия пролина в положении 324 в первичной последовательности токсина. Наиболее эффективно антитело ингибировало гемолиз эритроцитов, вызванный HlyII B-771, в последовательности которого в положении 324 присутствует Рro вместо Leu. Показано, что антитело LCTD-83 взаимодействует с образовавшимися порами на мембранах эритроцитов, блокируя при этом возможный выход внутриклеточного содержимого. HlyII и его мутантные формы получали с использованием рекомбинантных штаммов-продуцентов Escherichia coli BL21(DE3). Способность антител узнавать антигены характеризовали иммуноферментным анализом (ИФА) и иммуноблоттингом, иммунопреципитацию использовали для демонстрации взаимодействия с мембранными порами, сформированными токсином. LCTD-83 менее эффективно взаимодействовало с полноразмерным токсином, чем с HlyIILCTD, что подтвердило тот факт, что порообразование сопровождается изменением конформации токсина. В связи с этим для подавления цитолитического действия гемолизина II перспективны антитела, взаимодействующие с его олигомерной формой. LCTD-83 обладает потенциалом при выявлении путей нейтрализации токсина.

58 0

C-Terminal Domain of Bacillus cereus Hemolysin II is Capable of Forming Homo- and Hetero-Oligomeric Forms of Toxin on the Membrane Surface

Issue number 4 from 12.02.2025

Гемолизин II (НlyII) – один из ключевых патогенных факторов условно-патогенной грамположительной бактерии Bacillus cereus. НlyII, образуя поры на мембранах, лизирует клетки-мишени. НlyII относят к группе β-пороформирующих токсинов. Отличительная особенность НlyII – наличие C-концевого домена из 94 а.о. (НlyIICTD). Показано, что в слабокислых условиях (pH 5.0), соответствующих примембранной области, C-концевые домены (как сами по себе, так и в составе токсина) образуют устойчивые комплексы, состоящие из полиоразмерных и укороченных молекул токсина. НlyII, НlyIILCTD (большой C-концевой фрагмент Met225–Ile412) и НlyIICTD получали с использованием рекомбинантных штаммов-продуцентов Escherichia coli BL21(DE3). Биотинилирование НlyIICTD проводили с использованием N-гидроксисукцинимидного эфира биотина. Взаимодействие НlyIICTD с НlyIICTD, НlyIILCTD и НlyII, а также взаимодействие НlyIICTD с мембранами эритроцитов исследовали иммуноферментным анализом и иммунобиоттингом, как с использованием стрептавидина, конъюгированного с пероксидазой хрена, так и с использованием моноклональных антител против НlyII. НlyIICTD в слабокислых условиях взаимодействовал как с доменом НlyIICTD в составе полиоразмерного токсина, так и с белком НlyIICTD. Взаимодействие НlyIICTD с мембраной эритроцитов кратно увеличивалось в присутствии токсина.

20 0