- Код статьи
- S19982860S0132342325050235-1
- DOI
- 10.7868/S1998286025050235
- Тип публикации
- Статья
- Статус публикации
- Опубликовано
- Авторы
- Том/ Выпуск
- Том 51 / Номер выпуска 5
- Страницы
- 988-1000
- Аннотация
- Дрожжи нашли широкое применение в пищевой и фармацевтической промышленности как микробные клеточные фабрики рекомбинантных белков за способность к гетерологической сверхэкспрессии многих целевых белков, в том числе протеолитических ферментов. Протеаза-активатор протеина С (PAPC) плазмы крови из микромицета VKM F-4104D потенциально может быть внедрена в терапевтическую практику в качестве фибринолитического лекарственного средства, а также в диагностические системы для анализа свертываемости крови в роли основного компонента, активирующего протеин С. Для решения задач по применению протеазы-активатора протеина С в медицине и ветеринарии важно иметь надежную систему продукции рекомбинантного фермента. Такая система продукции может быть создана на основе дрожжей. Цель данной работы заключалась в создании штамма-продуцента PAPC на основе дрожжей и демонстрации успешной продукции и секреции протеолитического фермента в культуральную жидкость. Нами был сконструирован вектор, несущий ген . Этим вектором были трансформированы дрожжи , проведена селекция трансформантов на среде, содержащей антибиотик зеоцин. При помощи селекции на агаризованной среде с казеином, а также анализа культуральной жидкости методом белкового электрофореза в ПААГ были отобраны наиболее эффективные клоны-продуценты целевого фермента. Исследована динамика накопления активной формы PAPC в культуральной жидкости после индукции белкового синтеза при глубинном культивировании продуцирующего клона в колбе. LC-MS-анализ подтвердил присутствие фермента в культуральной среде, а также показал, что его накопление происходит в зрелой ферментативно активной форме. Полученный в результате работы штамм-продуцент может быть использован для дальнейшего получения экспериментальных промышленных партий фермента на биотехнологических производствах, поддерживающих проведение дрожжевой ферментации.
- Ключевые слова
- PAPC дрожжевая экспрессия Array
- Дата публикации
- 01.05.2025
- Год выхода
- 2025
- Всего подписок
- 0
- Всего просмотров
- 1
Библиография
- 1. Banerjee G., Ray A.K. // Biotechnol. Genet. Eng. Rev. 2017. V. 33. P. 119–143. https://doi.org/10.1080/02648725.2017.1408256
- 2. Frolova A.S., Chepikova O.E., Deviataikina A.S., Solonkina A.D., Zamyatnin A.A. // Biology (Basel). 2023. V. 12. P. 797. https://doi.org/10.3390/biology12060797
- 3. Jabalia N., Chaudhary N. // GSTF J. BioSci. 2015. V. 3. P. 15–19. https://doi.org/10.7603/s40835-014-0005-8
- 4. Zhang Y., Huang H., Yao X., Du G., Chen J., Kang Z. // Bioresour. Technol. 2017. V. 247. P. 81–87. https://doi.org/10.1016/j.biortech.2017.08.006
- 5. Ramirez-Larrota J.S., Eckhard U. // Biomolecules. 2022. V. 12. P. 1–19. https://doi.org/10.3390/biom12020306
- 6. Osmolovskiy A.A., Kreyer V.G., Baranova N.A., Kurakov A.V., Egorov N.S. // Appl. Biochem. Microbiol. 2013. V. 49. P. 581–586. https://doi.org/10.1134/S0003683813060148
- 7. Osmolovskiy A.A., Kreyer V.G., Kurakov A.V., Baranova N.A., Egorov N.S. // Appl. Biochem. Microbiol. 2012. V. 48. P. 488–492. https://doi.org/10.1134/S0003683812050109
- 8. Bouwens E.A., Stavenuiter F., Mosnier L.O. // J. Thromb. Haemost. 2013. V. 11. P. 242–253. https://doi.org/10.1111/jth.12247
- 9. Mohammed S., Favaloro E.J. // Methods Mol. Biol. 2017. V. 1646. P. 137–143. https://doi.org/10.1007/978-1-4939-7196-1_10
- 10. Gempeler-Messina P.M., Volz K., Buhler B., Muller C. // Haemostasis. 2001. V. 31. P. 266–272. https://doi.org/10.1159/000048072
- 11. Osmolovskiy A.A., Orekhova A.V., Kreyer V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. // Biomed. Khim. 2018. V. 64. P. 115–118. https://doi.org/10.18097/PBMC20186401115
- 12. Nasr A.R., Komarevtsev S.K., Baidamshina D.R., Ryskulova A.B., Makarov D.A., Stepanenko V.N., Trizna E.Y., Gorshkova A.S., Osmolovskiy A.A., Miroshnikov K.A., Kayumov A.R. // Biochimie. 2025. V. 230. P. 33–42. https://doi.org/10.1016/j.biochi.2024.11.002
- 13. Komarevtsev S.K., Evseev P.V., Shneider M.M., Popova E.A., Tupikin A.E., Stepanenko V.N., Kabilov M.R., Shabunin S.V., Osmolovskiy A.A., Miroshnikov K.A. // Microorganisms. 2021. V. 9. P. 1–13. https://doi.org/10.3390/microorganisms9091936
- 14. Komarevtsev S.K., Popova E.A., Kreyer V.G., Miroshnikov K.A., Osmolovskiy A.A. // Appl. Biochem. Microbiol. 2020. V. 56. P. 32–36. https://doi.org/10.1134/S0003683820010093
- 15. Pan Y., Yang J., Wu J., Yang L., Fang H. // Front. Microbiol. 2022. V. 13. P. 1059777. https://doi.org/10.3389/fmicb.2022.1059777
- 16. Zhang Q., Wang X., Luo H., Wang Y., Tu T., Qin X., Su X., Huang H., Yao B., Bai Y., Zhang J. // Microb. Cell Fact. 2022. V. 21. P. 112. https://doi.org/10.1186/s12934-022-01837-x
- 17. Marillonnet S., Grutzner R. // Curr. Protoc. Mol. Biol. 2020. V. 130. P. 115. https://doi.org/10.1002/cpmb.115
- 18. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. // Molecular Cloning. A Laboratory Manual. 2nd Ed. / Ed. Nolan C. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.
- 19. Lin-Cereghino J., Wong W.W., Xiong S., Giang W., Luong L.T., Vu J., Johnson S.D., Lin-Cereghino G.P. // Biotechniques. 2005. V. 38. P. 44–48. https://doi.org/10.2144/05381BM04
- 20. Schagger H. // Nat. Protoc. 2006. V. 1. P. 16–22. https://doi.org/10.1038/nprot.2006.4
- 21. Looke M., Kristjuhan K., Kristjuhan A. // Biotechniques. 2011. V. 50. P. 325–328. https://doi.org/10.2144/000113672
- 22. Shevchenko A., Tomas H., Havlis J., Olsen J.V., Mann M. // Nat. Protoc. 2006. V. 1. P. 2856–2860. https://doi.org/10.1038/nprot.2006.468
- 23. Rappsilber J., Mann M., Ishihama Y. // Nat. Protoc. 2007. V. 2. P. 1896–1906. https://doi.org/10.1038/nprot.2007.261
- 24. Ma B., Zhang K., Hendrie C., Liang C., Li M., Doherty-Kirby A., Lajoie G. // Rapid Commun. Mass Spectrom. 2003. V. 17. P. 2337–2342. https://doi.org/10.1002/rcm.1196
- 25. Anson M.L. // Science. 1935. V. 81. P. 467–468. https://doi.org/10.1126/science.81.2106.467
- 26. Hagihara B., Matsubara H., Nakai M., Okunuki K. // J. Biochem. 1958. V. 45. P. 185–194. https://doi.org/10.1093/oxfordjournals.jbchem.a126856
