By this author

The Effect of Modification on the Intracellular Distribution of Zyxin in Xenopus laevis Embryos

Issue number 2 from 30.12.2025

Зиксин – консервативный механочувствительный LIM-доменный белок, регулирующий сборку F-актиновых филаментов в клеточных контактах. В то же время в ответ на растяжение клеток зиксин может перемещаться в ядро и регулировать экспрессию генов. Это перемещение может регулироваться его посттрансляционными модификациями. Поскольку зиксин признан онкомаркером, изучение модификаций этого белка и механизмов его перемещения между ядром и цитоплазмой открывает возможности для диагностических исследований на молекулярном уровне. С использованием модельного организма, эмбрионов шпорцевой лягушки (Xenopus laevis) на стадии гаструлы, было показано влияние направленного мутагенеза по сайтам пальмитилирования, глюкозаминилирования, а также по N- и С-концевым аминокислотным остаткам на способность зиксина перемещаться в ядро. Показано, что направленный мутагенез сайтов возможного пальмитилирования приводит к уменьшению количества зиксина в ядре, а мутирование аминокислот, подвергающихся глюкозаминилированию, наоборот, приводит к увеличению количества зиксина в ядре. Также было показано, что добавление Flag-эпитопа на С-конец молекулы зиксина приводит к утрате его способность к перемещению в ядро. Полученные данные впервые, насколько нам известно, свидетельствуют о влиянии указанных модификаций на перемещение зиксина и дополняют мировые исследования о механизмах изменения локализации механочувствительных белков семейства зиксина. Помимо фундаментального значения, эти данные могут иметь перспективную ценность и для биомедицинских исследований, в особенности учитывая тот факт, что нарушение внутриклеточной локализации зиксин-подобных белков приводит к образованию раковых опухолей и заболеваний сердечно-сосудистой системы.

56 0

Mass Spectrometric Analysis of Xenopus laevis Cytoskeletal Protein Zyxin Post-Translational Modifications

Issue number 3 from 30.12.2025

Цитоскелетный LIM-доменный белок зиксин активно изучается в связи с его вовлеченностью в основные процессы, происходящие в клетке - от механосенсорной функции и регуляции полимеризации актина в клеточных контактах до участия в регуляции генной экспрессии в ядре. Нарушение экспрессии и процессинга зиксина наблюдается при канцерогенезе и приводит к развитию сердечно-сосудистых заболеваний. Для зиксина млекопитающих известно, что этот белок подвергается посттрансляционным модификациям, которые регулируют его активность и внутриклеточную локализацию. Поскольку зиксин эволюционно высококонсервативный белок, мы провели поиск посттрансляционных модификаций гомолога зиксина из шпорцевой лягушки Xenopus laevis с использованием хромато-масс-спектрометрии. Для поиска модифицированных пептидов был применен метод обогащения при помощи коиммунопреципитации эндогенного зиксина из лизатов клеток зародышей на стадии гаструлы. В результате были обнаружены неизвестные ранее модификации этого белка - N-концевое ацетилирование по позиции Met1 и фосфорилирование по Ser197 и Ser386. Для идентификации изоформ зиксина с различной электрофоретической подвижностью было проведено разделение с помощью электрофореза в ПААГ. Зиксин был обнаружен в полосах с электрофоретической подвижностью 70 и 105 кДа. Таким образом, в работе получены новые данные о посттрансляционных модификациях зиксина из X. laevis. Поскольку дефекты механической передачи сигнала связаны с нарушениями развития, онкогенезом и метастазированием, изучение модификаций и процессинга механочувствительного белка зиксина на модельном организме X. laevis открывает возможности для диагностических исследований на молекулярном уровне, которые в дальнейшем могут быть использованы для определения перспективности применения лекарственных препаратов в фармакологии.

12 0

Regulation of pou5f3 Family Pluripotency Gene Transcripts Stability by Ybx1 Ribonucleoprotein Complexes in Xenopus laevis Early Development

Issue number 3 from 30.12.2025

Проведено исследование механизма регуляции стабильности транскриптов генов семейства pou5f3 белком рибонуклеопротеиновых комплексов Ybx1. Известно, что у шпорцевой лягушки Xenopus laevis есть три гена семейства POU5: pou5f3.1/oct91, pou5f3.2/oct25, pou5f3.3/oct60. Факторы семейства Pou5f.3 выступают ортологами фактора плюрипотентности эмбриональных стволовых клеток OCT4 млекопитающих. При этом экспрессия генов, кодирующих эти факторы, различается во времени. Так, транскрипты гена pou5f3.3/oct60 запасаются в ооцитах, присутствуют в большом количестве в оплодотворенной яйцеклетке - зиготе, а далее только деградируют. Транскрипты pou5f3.2/oct25 также присутствуют зиготе, но в дальнейшем развитии их количество еще более возрастает. Наконец, транскрипция pou5f3.1/oct91 начинается только после активации генома зародыша на стадии средней бластулы. Нами выявлена гораздо более высокая специфичность фактора Ybxl к образованию комплекса с материнской мРНК гена pou5J3.3/oct60 по сравнению с зиготическими мРНК генов pou5f3.1/oct91, pou5f3.2/oct25. Поскольку Ybxl - белок, который с одной стороны, участвует во взаимодействии с белками цитоскелета, а с другой, связывает и стабилизирует материнскую мРНК генов плюрипотентности, можно предположить его связующую роль между деградацией этих материнских транскриптов и перестройкой цитоскелета в период начала морфогенетических движений клеток в процессе формирования зародышевых листков.

11 0