Статьи автора

Провоспалительный фенотип CD161 дважды негативных Т-клеток

Номер выпуска 5 от 01.05.2025

Дважды негативные (DN) CD3CD4CD8 T-лимфоциты представляют собой подгруппу неклассических периферических T-клеток. Хотя их представленность в периферической крови относительно невысока (3–5%), они играют важную роль при развитии воспалительных реакций, онкологических, аутоиммунных заболеваний и аллергической астмы. В настоящем исследовании мы охарактеризовали цитокиновый профиль CD3CD4CD8 DN T-клеток с помощью мультиплексной технологии с широкой панелью аналитов. Показано, что цитокиновый профиль провоспалительных αβTCRCD161 DN T-клеток включает цитокины TNFα, IFNγ, IL-3, IL-13 и IL-27, хемокины IL-8/CXCL8, MIG/CXCL9, MIP-1α/CCL3, MIP-1β/CCL4 и RANTES/CCL5, а также факторы роста M-CSF и GM-CSF.

0

Трехпетельные токсины гадюк – клонирование кДНК и экспрессия в с использованием химерной (гибридной) конструкции с белком-партнером SUMO

Номер выпуска 5 от 01.05.2025

Трехпетельные токсины (ТПТ) образуют одно из наиболее обширных семейств токсинов змеиных ядов. ТПТ характерны для большинства ядов аспид, но практически не встречаются в ядах гадюк. С использованием ядовитых желез гадюк и был получен 21 клон кДНК, кодирующий эту группу токсинов. Из полученных последовательностей кДНК были выведены аминокислотные последовательности 9 ТПТ. Установленные последовательности имеют сигнальные пептиды, содержащие 19-21 аминокислотный остаток, за которыми следует зрелый белок, состоящий из 67 остатков. Все ТПТ гадюк относятся к группе нетрадиционных (non-conventional) токсинов, а их последовательности содержат 9 остатков цистеина. ТПТ, кодируемый одним из транскриптов, был получен гетерологической экспрессией в клетках в виде гибридного белка с растительным белком-партнером SUMO с последующим отщеплением специфичной растительной протеазой Bd-SENP1 и хроматографической очисткой. Структура полученного белка подтверждена методом масс-спектрометрии. Анализ его биологической активности показал, что этот токсин – слабый антагонист никотиновых холинорецепторов нейронного α7 и α3β2 подтипов. С использованием гибридного белка с SUMO мы также попытались получить ТПТ Aze-2 гадюки , аминокислотная последовательность которого была установлена нами ранее в результате транскриптомного анализа ядовитой железы , а сам белок в минимальных количествах был идентифицирован в яде этой змеи. Однако токсин, точно соответствующий по массе Aze-2, с использованием этого подхода получить не удалось. Таким образом, в результате работы были установлены аминокислотные последовательности 9 ТПТ гадюк, один из которых был получен экспрессией гена в клетках и проявил способность взаимодействовать с никотиновыми холинорецепторами нейронного α7 и α3β2 подтипов.

0